雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
熒光素（Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱(chēng)，其中螢火蟲(chóng)熒光素 F-Luciferase 和海腎熒光素 R-Luciferase 最具有代表性。目前，雙熒光素酶通常是指螢火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素。這兩種酶的主要區(qū)別：1. 物種來(lái)源不同；2. 它們的底物和輔因子不同；3. 發(fā)光的顏色不同。螢火蟲(chóng)螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白，從甲蟲(chóng)（
2022-11-11
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？
研究中常用的細(xì)胞系/株系是現(xiàn)成的，我們只需要進(jìn)行細(xì)胞傳代和種子保存。然而，這些細(xì)胞系往往因長(zhǎng)期體外培養(yǎng)而失去原有的生物學(xué)特性，對(duì)藥物治療的反應(yīng)差距越來(lái)越大。因此，越來(lái)越多的人選擇原代細(xì)胞。來(lái)源于胚胎、組織、器官和外周血，經(jīng)特殊分離方法制備的原代培養(yǎng)細(xì)胞稱(chēng)為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞培養(yǎng)，也稱(chēng)為原代培養(yǎng)，
2022-11-10
SD大鼠乳鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法
1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開(kāi)胸，取出心臟后于含有雙抗的預(yù)冷過(guò)的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺(tái)。2.仔細(xì)剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內(nèi)、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，組織塊間隔1-2mm，放入5% CO2，37℃恒溫培養(yǎng)
2022-11-09
SD大鼠牙髓干細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法
1. 處死動(dòng)物，分離下頜骨，自中縫處將其分為兩半。2. 打開(kāi)髓腔，取出牙髓，去除頂端的apical button，在培養(yǎng)皿中用顯微剪剪碎，注意冰上操作。3. 將牙髓轉(zhuǎn)入15ml離心管中，終濃度1.5mg/ml的Collagenase I于37℃，5% CO2條件下消化40min。4. 加入完全培養(yǎng)基（MEM+10%FBS+1%雙抗）終止消化，4℃，360g離心10min收集沉淀。5. P
2022-11-09
宏基因組測(cè)序mNGS在新型冠狀病毒檢測(cè)中的應(yīng)用
此次新型肺炎疫情監(jiān)測(cè)和防控中，病原宏基因組測(cè)序（mNGS）發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，利用其技術(shù)優(yōu)勢(shì)，研究人員在5天內(nèi)就鑒定分析出新型冠狀病毒的基因組，而2003年SARS的鑒定耗時(shí)5月余、2013年H7N9的鑒定耗時(shí)1月余。2020年2月5日，武漢大學(xué)病毒學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、武漢大學(xué)中南醫(yī)院、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院和中山大
2022-11-03
腸道微生物調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)心血管藥物的反應(yīng)
心血管疾?。–VD）仍然是全球范圍內(nèi)主要的死亡原因。腸道菌群的改變與動(dòng)脈粥樣硬化，血脂異常，高血壓和心力衰竭有關(guān)。微生物群具有代謝藥物的能力，這引起了藥物藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)改變或形成有毒代謝物，從而干擾藥物的反應(yīng)。早期有證據(jù)表明，腸道微生物組可調(diào)節(jié)對(duì)機(jī)體對(duì)他汀類(lèi)藥物和降壓藥物的反應(yīng)。因此，腸道微生物組對(duì)
2022-11-03
肝臟EV轉(zhuǎn)運(yùn)miRNA調(diào)控脂肪組織重塑的機(jī)制研究
2020年2月5日，南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院趙越、方雷、李朝軍團(tuán)隊(duì)的最新研究發(fā)表在國(guó)際著名學(xué)術(shù)期刊《Nature Communications》上（影響因子11.878），題目為《Liver governs adipose remodelling via extracellular vesicles in response to lipid overload》，本文揭示了在營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩狀態(tài)下，肝臟感知機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，重塑脂肪組織功能，調(diào)
2022-11-02
單細(xì)胞測(cè)序在終末期腎病(ESRD)研究中的應(yīng)用
慢性腎臟?。–KD）已成為一項(xiàng)全世界公共的健康問(wèn)題，患病率和醫(yī)療花銷(xiāo)不斷走高，給個(gè)人和政府都造成了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。終末期腎病（ESRD）患者是腎功能逐漸喪失的晚期患者，其并發(fā)癥和死亡風(fēng)險(xiǎn)非常高，而且預(yù)期壽命也明顯短于普通人群。通常，免疫異常被認(rèn)為是并發(fā)癥的催化因素，也是導(dǎo)致ESRD死亡的主要危險(xiǎn)因素之一。在過(guò)去
2022-11-02
單細(xì)胞測(cè)序在A(yíng)D研究中的應(yīng)用
阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease, AD）是一種普遍存在的神經(jīng)退行性疾病，迄今為止，我們對(duì)該疾病的分子和細(xì)胞復(fù)雜性仍知之甚少。美國(guó)麻省理工學(xué)院的研究人員首次對(duì)阿爾茨海默病患者的前額皮質(zhì)中表達(dá)的基因進(jìn)行了綜合分析。他們通過(guò)分析鑒定出了在神經(jīng)元和其他類(lèi)型的腦細(xì)胞中受影響的獨(dú)特細(xì)胞通路，相關(guān)研究結(jié)果發(fā)表在
2022-11-01
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序揭示衰老細(xì)胞的異質(zhì)性
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序揭示端粒侵蝕誘導(dǎo)的衰老細(xì)胞異質(zhì)性自2009年單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（scRNA-seq）問(wèn)世以來(lái)，在過(guò)去的十年里，scRNA-seq技術(shù)得到了蓬勃的發(fā)展，從而使得可在單細(xì)胞水平揭示全基因組范圍內(nèi)所有基因的表達(dá)情況，可以更精準(zhǔn)的開(kāi)展細(xì)胞表達(dá)異質(zhì)性研究、鑒定新的細(xì)胞亞型、描繪細(xì)胞發(fā)育路徑、鑒定分子Marker等。目前
2022-11-01
單細(xì)胞測(cè)序?qū)ｎ}—骨相關(guān)研究
近年來(lái)，骨科學(xué)在診斷、治療、科研方面都取得了極大的進(jìn)展。然而，隨著中國(guó)社會(huì)人口老齡化的進(jìn)展，因老年性骨質(zhì)疏松引起的骨折和關(guān)節(jié)病逐漸增多；隨著私家交通工具的廣泛普及，因交通事故引起的骨創(chuàng)傷明顯增多；隨著日益嚴(yán)重的環(huán)境污染，骨腫瘤和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病也相應(yīng)增多。現(xiàn)代骨科病譜發(fā)生了很大變化，因此，骨科學(xué)
2022-10-31
單細(xì)胞測(cè)序?qū)ｎ}—膿毒血癥
膿毒癥（sepsis）是指由感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征。膿毒癥具有“三高”特點(diǎn)：患病率高、病死率高、治療費(fèi)用高。全球每年膿毒癥患病人數(shù)超過(guò)1900萬(wàn)，膿毒癥病情兇險(xiǎn)，治療花費(fèi)高，已經(jīng)成為臨床危重病患者的重要死亡原因之一。即使治愈后存活的患者，也可能存在認(rèn)知功能障礙，嚴(yán)重影響人類(lèi)的生活質(zhì)量，對(duì)人類(lèi)健康造成極大
2022-10-31
Molecular Therapy | 低氧刺激誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞肌源性譜系分化
正常情況下，空氣中氧氣濃度為21%左右。而人類(lèi)的生存離不開(kāi)氧氣，但是，適當(dāng)?shù)牡脱跷h(huán)境對(duì)人類(lèi)的生長(zhǎng)發(fā)育有著重要作用。在此，我們將為大家分享一篇發(fā)表在Molecular Therapy (IF8.986)期刊的文章“The MicroRNA-92a/Sp1/MyoD Axis Regulates Hypoxic Stimulation of Myogenic Lineage Differentiation i
2022-10-28
原代心肌細(xì)胞的應(yīng)用 | SCI分享
隨著生命科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，越來(lái)越多的生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中采用原代細(xì)胞作為材料開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究。相比于細(xì)胞系，原代細(xì)胞更接近活體內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)。因此，在體外研究中，以原代細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具有說(shuō)服力。 以原代心肌細(xì)胞 為例，其作為一種重要的研究模型被廣泛應(yīng)用于心血管研究之中。下
2022-10-28
C57小鼠皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)方法
-Experimental methods-C57小鼠皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)方法一起來(lái)看一下吧實(shí)驗(yàn)步驟 ①將實(shí)驗(yàn)小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。②仔細(xì)剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。③分離真表皮，去除表皮后，PBS清
2022-10-27
從肝臟組織中制備細(xì)胞核
— Cell experiment —從肝臟組織中制備細(xì)胞核一材料與儀器大鼠、裂解緩沖液、濃蔗糖溶液、超速離心機(jī)、組織研磨器二實(shí)驗(yàn)步驟01配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液（PMSF 在使用前添加），冰上放置。配制裂解緩沖液：0.25 mol/L蔗糖網(wǎng)織紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（RSB）0.25 mol/L蔗糖（超級(jí)純）10 mm
2022-10-27
ONCOGENESIS|腸道腫瘤類(lèi)器官的應(yīng)用研究
ONCOGENESIS|腸道腫瘤類(lèi)器官的應(yīng)用研究類(lèi)器官（Organoids）類(lèi)器官是一項(xiàng)創(chuàng)新性較高的研究技術(shù)，近幾年來(lái)受到科研人士的追捧和廣泛好評(píng)。目前，我們國(guó)家在政策層面也給予了大力地支持。2021年科技部發(fā)布的“十四五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“干細(xì)胞研究與器官修復(fù)”重點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)中也特別提到疾病類(lèi)器官模型。什么是類(lèi)器官（Organoids）
2022-10-26
有科學(xué)依據(jù)表明：心頭的傷總是很難愈合的！
有科學(xué)依據(jù)表明：心頭的傷總是很難愈合的！副標(biāo)題：原代心肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)01心臟缺乏自我修復(fù)和再生能力如果手指不小心被割傷，要不了幾天，傷口就會(huì)自行愈合，那么究竟是什么魔力讓傷口愈合了呢？答案就是：人體具有自我修復(fù)的能力。此前，美國(guó)健康雜志刊出了《人體具有神奇的自我修復(fù)功能》的文章，該研究也證實(shí)了人體的
2022-10-26
細(xì)胞增殖分析（CCK-8 法）
Cell Counting Kit-8（簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。CCK-8 & MTT 方法比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)CCK-8法靈敏度高、不使用有機(jī)溶劑、檢測(cè)迅速、重復(fù)性好價(jià)格較MTT貴、CCK8試劑的顏色為淡紅色、與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，容易漏加或多加MTT法價(jià)格便宜操作步驟較多，需要使用有機(jī)試劑，靈敏度不如C
2022-09-19
從哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織分離DNA
材料與儀器：細(xì)胞、TBS抽提緩沖液、離心管實(shí)驗(yàn)步驟：步驟1：根據(jù)樣品類(lèi)型，從下列方法中選一個(gè)作為步驟1進(jìn)行操作。(1) 細(xì)胞樣品① 單層培養(yǎng)的細(xì)胞以用冰預(yù)冷的TBS 將單層細(xì)胞洗滌2次，用刮棒把細(xì)胞刮入約0.5ml 的 TBS 中，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到冰浴的離心管中，用1ml TBS沖洗培養(yǎng)皿，并入離心管中的細(xì)胞懸液。于 4℃
2022-09-13